Как собрать мочу на посев у ребенка 2 года

Бактериологический посев (бакпосев или бактериологическое исследование мочи) на наличие патологической микрофлоры – высокоточный микробиологический анализ, позволяющий не только выделить и идентифицировать возбудителя мочевой инфекции, но и определить его точную концентрацию (степень бактериурии), а также степень чувствительности к важнейшим группам антибактериальных средств.

Исследование позволяет:

1. 1Идентифицировать возбудителя инфекции;
2. 2Определить его диагностический титр в 1 мл мочи;
3. 3Выявить наличие антибиотикорезистентности (устойчивости или чувствительности к антибиотикам);
4. 4Отслеживать снижение титра возбудителя в процессе терапии;
5. 5Выбрать наиболее эффективные антибактериальные препараты лечения;
6. 6Осуществлять мониторинг распространённости в популяции антибиотико-резистентных штаммов микроорганизмов.

1. Показания к бактериологическому исследованию мочи

Основными целями анализа, которые преследует лечащий врач при назначении бакпосева мочи, являются диагностика и мониторинг бактериальных инфекций органов мочевого тракта, а также определение чувствительности патогена к антибиотикотерапии.

Иногда бактериологическое исследование (бакпосев) мочи применяется в качестве скрининга для профилактики воспалительных заболеваний мочевого тракта у лиц повышенного риска (беременные, пожилые, больные сахарным диабетом). Основным показанием к назначению бакпосева мочи является наличие симптомов мочевой инфекции.

Однако, согласно российским урологическим рекомендациям, при выявлении у пациента неосложненной мочевой инфекции, а также при отсутствии сопутствующих заболеваний, антибактериальная терапия может назначаться эмпирическим путем, без предварительного определения возбудителя. Эмпирическое назначение антибиотиков позволяет достичь положительного эффекта примерно в 75-80% случаев.

Безусловными показаниями к проведению исследования мочи на микрофлору служат:

1. 1Инфекции мочевого тракта у беременных;
2. 2Подозрение на наличие у пациента пиелонефрита;
3. 3Все случаи инфицирования мочевых путей у мужчин;
4. 4Вспышки госпитальных урологических инфекций;
5. 5Лихорадка при длительной катетеризации мочевого пузыря, а также подозрение на урологическую инфекцию, связанную с проведением медицинской манипуляции (цистоскопии, катетеризации);
6. 6Лихорадка выше 38 С без видимых причин у детей в возрастной группе до 3-х лет;
7. 7Рецидивирующие мочевые инфекции, неэффективность проводимой ранее эмпирической антимикробной терапии;
8. 8Осложненные мочевые инфекции в возрасте старше 65 лет;
9. 9Появление симптомов урологической инфекции у лиц с нарушением иммунного статуса, хроническими болезнями почек, сахарным диабетом, врожденными аномалиями строения почек и мочеточников, после операции по трансплантации почки;
10. 10Прием больным в течение трех предшествующих месяцев антибактериальных препаратов, что теоретически могло привести к формированию резистентных форм возбудителей.

Согласно рекомендациям МЗ РФ, регламентируется обязательный скрининговый бактериологический посев мочи, даже в отсутствии симптомов патологии мочевой системы, у следующих групп населения:

1. 1Женщины в период беременности, после 14 недели, даже в отсутствии каких-либо симптомов патологии, что позволяет снизить риск развития пиелонефрита беременных;
2. 2Больные с планируемым проведением хирургического вмешательства на органах мочевыделительной системы;
3. 3Пациенты с наличием почечного трансплантата в течение первых двух месяцев после проведения оперативного вмешательства, а далее при любом ухудшении работы трансплантированного органа.

2. Правила сбора материала

Как правильно сдавать бакпосев мочи при беременности, у взрослых и детей рассмотрим далее. Для обеспечения точности лабораторной диагностики урологической инфекции важно соблюдение всех этапов диагностики, в том числе и преаналитической ее части – сбора проб мочи и их доставки.

Именно потребность в определении точного количества бактериальных агентов в исследуемом образце предъявляет особые требования к сбору образцов.

При проведении исследования в условиях стационара, за подготовку пациента, сбор материала и транспортировку его в лабораторию отвечает средний медицинский персонал стационара. Для таких случаев в лабораториях имеются инструкции в письменной форме, регламентирующие все диагностические этапы.

При обследовании в амбулаторных условиях, больной производит сбор мочи самостоятельно, без наблюдения медицинского работника. В связи с вышесказанным, необходимо тщательно инструктировать пациента по технике выполнения самостоятельного сбора исследуемого материала, во избежание ложного результата анализа.

1. 1Забор мочи необходимо производить в специально предназначенную для этого стерильную одноразовую емкость, которую можно приобрести в аптечной сети. Не допускается забор мочи в нестерильные, ранее бывшие в употреблении контейнеры, баночки или бутылки;
2. 2По возможности забор мочи должен производиться до начала приема антибактериальных препаратов или в интервалах между лекарственными курсами, для исключения искажения полученной информации;
3. 3Наиболее достоверно исследование средней утренней порции мочи – после ночного сна и до завтрака;
4. 4Вечером, накануне сбора мочи рекомендуется по возможности воздержаться от приема мочегонных средств, так как при их приеме происходит разбавление мочи и снижение общего числа бактерий в одном миллилитре;
5. 5Для забора мочи у грудничков следует пользоваться специальными детскими мочеприемниками с гипоаллергенным адгезивным средством, собранный образец в последствии переливается в емкость для сбора мочи, маркируется и транспортируется в лабораторию.

3. Основные этапы самостоятельного забора мочи

Описанная ниже процедура сбора мочи применяется у всех взрослых, в том числе и беременных женщин. Оптимальный объем мочи для проведения микробиологического анализа составляет примерно 10-20 мл, а минимальный не должен быть менее 1 мл.

Этапы самостоятельного сбора исследуемого материала можно представить следующим образом:

1. 1Тщательно вымыть руки мыльной водой, насухо вытереть их чистым (желательно одноразовым) полотенцем;
2. 2Произвести туалет наружных половых органов с использованием теплой мыльной воды, без использования кожных антисептиков, просушить паховую область чистой одноразовой салфеткой;
3. 3Открыть заранее подготовленный стерильный контейнер, избегая дотрагиваться пальцами до его внутренних поверхностей;
4. 4Выпустить первую порцию мочи, остановить мочеиспускание;
5. 5Следующую (среднюю) порцию собрать в подготовленный стерильный контейнер, не касаясь емкостью кожных покровов в паховой области;
6. 6Завершить мочеиспускание в унитаз;
7. 7Плотно закрыть крышку заполненного контейнера, подписать, прикрепить к контейнеру направление на анализ тонкой резинкой, доставить его в лабораторию.

Недопустимо использовать для микробиологического исследования мочу из подкладного судна и мочу у женщин в период менструаций.

Как правильно собрать мочу на бакпосев у ребенка?

1. 1Дать ребенку выпить теплой воды или иной жидкости (грудничку можно дать грудь);
2. 2Помыть руки мыльной водой, высушить чистым полотенцем;
3. 3Произвести туалет наружных половых органов ребенка;
4. 4По возможности произвести забор средней порции мочи, усадив ребенка на колени помощника. При невозможности забора средней порции можно воспользоваться специально предназначенным детским мочеприемником, проверять который следует не реже, чем каждые 10 минут.
5. 5Нельзя использовать для анализа мочу из горшка.

4. Правила доставки материала в лабораторию

Условия доставки образца мочи в лабораторию оказывают прямое влияние на точность проведенного бактериологического исследования, поскольку они могут как снижать жизнеспособность, так и стимулировать размножение бактерий в представленной порции мочи.

Образец следует доставить в лабораторию не позднее, чем через два часа после забора. Оптимальный срок посева проб мочи составляет менее 30 минут после мочеиспускания, однако в связи с трудностью реализации приведенного условия, данный срок во многих лабораториях регламентируется до 1-2 часов.

При невозможности осуществления доставки в указанный срок, разрешается хранение материала при температуре не выше +40С в течение суток с момента забора. Замораживать образец мочи запрещено – это приводит к гибели некоторых видов микроорганизмов.

Для повышения качества исследования, а также для обеспечения более длительного хранения допускается использование специальных стабилизаторов, например, 1% борной кислоты. Однако, добавление таких консервантов допустимо лишь в строго разрешенном объеме.

В связи с этим, при проведении бактериологического исследования мочи, целесообразно использование коммерческих транспортных систем (спец.пробирок), в которых при добавлении определенного количества мочи достигается определённая концентрация консерванта.

При наличии специальных тест-систем возможно проведение экспресс-бакпосева, не отходя от постели больного (тест-полоски «Диаслайд», «Дипстрик»), однако в России это мало распространено в связи с дороговизной оборудования.

Все поступившие в лабораторию образцы мочи обязательно маркируются лаборантом любым доступным способом, позволяющим точно идентифицировать одну пробу от другой.

Не принимаются на исследование:

1. 1Пробы мочи без маркировки и направления;
2. 2Пробы без указания даты, времени и метода сбора;
3. 3Подвергшиеся хранению более 24 часов от момента доставки;
4. 4При нарушенной целостности контейнера для сбора;
5. 5Пролитые и открытые образцы.

5. Техника выполнения

Российские лаборатории выполняют исследование мочи на микрофлору согласно приказу МЗ №535 от 22.04.1985 года “ОБ УНИФИКАЦИИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ (БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ) МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ, ПРИМЕНЯЕМЫХ В КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРИЯХ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ УЧРЕЖДЕНИЙ”

За последние несколько лет приказ неоднократно дополнялся и обновлялся.

В проведении бактериологического посева участвуют врач-бактериолог и лаборант (фельдшер-лаборант). В обязанности врача входит контроль технологии проведения исследования и непосредственное выполнение всех необходимых этапов диагностики.

Лаборант же отвечает за прием поступивших проб мочи, оформление сопроводительных документов к ним, приготовление необходимых диагностических сред и реагентов, культивирование посева, количественный подсчет выращенных бактериальных колоний, уничтожение расходных материалов и остатков проб.

Для проведения посева используется несколько типов питательных сред:

1. 1Универсальные (кровяной агар, CLED) – поддерживающие рост как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов;
2. 2Дифференциально-диагностические (хромогенные) – используемые для дифференцировки уропатогенов, меняющие цвет при контакте с продуктами их жизнедеятельности;
3. 3Селективные (колумбийский агар, агар Эндо, МакКонки) – позволяют отдельно выращивать грамположительные и грамотрицательные возбудители.

Приобретение питательных сред для культивирования возбудителей происходит в готовом виде или в виде специализированных сухих смесей для самостоятельного приготовления. Для сухих смесей обязательно прилагается инструкция, точно регламентирующая все этапы приготовления.

Для получения результата бакпосева мочи не секторным методом в чашку Петри, заполненную неселективной средой наносится определенный объем исследуемого материала (в данном случае ровно 1 мкл мочи). Затем в исследуемый образец погружается специальная микробиологическая петля, татированная на соответствующий объем.

Материал распределяется по поверхности в центральной области в виде нескольких прямых линий, а затем горизонтальными штрихами, перпендикулярными им.

При использовании метода секторных посевов, чашку Петри заранее делят на 4 равных сектора, обозначенными буквами алфавита. Стерильной петлей выполняется посев мочи в количестве 0,005 мл, поочерёдно в четырех секторах. При переходе в последующий сектор петлю предварительно прожигают.

Посев мочи на неселективные среды позволяет произвести количественный посев, тогда как селективные среды используются для получения изолированных колоний и первичного определения микроорганизма, поэтому моча наносится на них не мерно.

Чашки Петри находятся в термостате при температуре 35-37 в течение 18-24 часов, после чего производится подсчет результата. В некоторых случаях (слабый рост флоры, несоответствие результата клинической картине, подозрение на наличие грибов и т.д.) инкубация может быть продлена до 2-х суток.

При обнаружении роста бактерий с помощью специальных таблиц производится учет всех типов выросших колоний, а также оценивается их возможная патогенность.

При обнаружении вероятных уропатогенов производится их дальнейшая идентификация с помощью исследования культуральных, биохимических, тинкториальных и агглютинативных свойств, а также определяется степень их чувствительности к антимикробным препаратам.

6. Определение антибактериальной чувствительности

Определение чувствительности уропатогенам к антибиотикам производится одним из трех методов, рекомендованных европейским комитетом по антибиотикорезистентности:

1. 1Дисковым методом – на поверхность агара в чашке Петри наносят взвесь бактерий заранее известной плотности, затем помещают сверху диски, содержащие определенную концентрацию антибиотика, что приводит к появлению зоны подавления роста бактерий, по диаметру которой судят о чувствительности микроорганизма и определяют минимальную подавляющую концентрацию препарата;
2. 2Градиентно-диффузным Е-тестом – метод схож с дисковым, однако вместо антибактериальных дисков используются полоски с Е-тестом, содержащие концентрационный градиент антибиотика от минимума к максимуму. В данном случае также определяется минимальная подавляющая концентрация препарата;
3. 3Методом серийных разведений – антибиотик разводится в нескольких, заранее известных концентрациях, после чего вводится в агар для культивирования бактерий. По степени подавления бактериального роста также можно судить о наличии или отсутствии чувствительности к антибиотику.

7. Интерпретация результатов

При расшифровке результата бакпосева мочи обязательно учитывается выраженность клинических проявлений урологической инфекции, соблюдение методики забора материала, правил транспортировки и хранении образцов.

Все виды урологических инфекций можно поделить на моно- и смешанные, протекающие с выделением до двух видов возбудителей.

При обнаружении в исследуемом материале трех и более патогенов ситуацию рассматривают как признак случайной контаминации (загрязнения) пробы мочи. В этом случае исследование рекомендовано повторить с соблюдением всех этапов забора и диагностики.

В настоящее время все бактерии, обнаруживаемые в мочевых путях принято делить на три группы, что влияет на их минимально значимый диагностический титр (при посеве 1 мкл):

• Первичные патогены (кишечная палочка, сальмонеллы, микобактерии, лептоспиры). Эти микроорганизмы являются облигатными патогенами, их минимально значимый диагностический титр более 10х3 КОЕ/мл;
• Вторичные патогены (энтеробактерии, клебсиеллы, синегнойная палочка, золотистый стафилококк, гемофильная палочка).

Данные возбудители патогенны лишь в определенных условиях – при ослаблении иммунитета, после инвазивных лечебных процедур, при сопутствующих хронических состояниях более, их минимальный диагностический титр 10х4 КОЕ/мл;

• Сомнительные патогены (коагулазонегативные стафилококки, стрептококк агалактия, ацинетобактер, Pseudomonas spp, их минимальная диагностическая концентрация более 10х5 КОЕ/мл.

Выделение представителей нормальной микрофлоры, таких как дифтероиды, гарднереллы, альфа-гемолитические стрептококки не является диагностически значимым.

8. Причины ложных результатов

Одной из самых значимых причин появления ложных результатов бактериологического анализа мочи является несоблюдение стандартизированной технологии проведения исследования, в частности:

1. 1Увеличение посевной дозы исследуемого материала;
2. 2Несоблюдение продолжительности преаналитического периода хранения мочи;
3. 3Нарушение норм сбора мочи;
4. 4Отсутствие гигиены наружных половых органов перед сбором мочи;
5. 5Сбор мочи в неподходящие емкости;
6. 6Нарушение температурного режима хранения и транспортировки;
7. 7Проведение исследования в период антибиотикотерапии или в период менструаций у женщин;
8. 8Несоблюдение времени выдержки материала в термостате.